自己免疫性再生不良性貧血における自己抗原の解析: CD4陽性T細胞エピトープの同定

フォーマット:

論文

責任表示:

中尾, 眞二 ; Nakao, Shinji

言語:

日本語

出版情報:

2004-04-13

著者名:

• 中尾, 眞二
• Nakao, Shinji

掲載情報:

平成14(2002)年度 科学研究費補助金 基盤研究(B) 研究成果報告書概要 = 2002 Fiscal Year Final Research Report Summary

巻:

2001 – 2002

開始ページ:

2p.

バージョン:

author

概要:

金沢大学大学院・医学系研究科<br />再生不良性貧血の免疫病態に密接に関与するCD4陽性T細胞クローンZN1のエピトープを同定するため、Herpesvirus saimiri感染により不死化したZN1の標的細胞をスクリーニングしたところ、造血因子の存在下で1週間培養した自己骨髄単核細胞が、ZN1の有意な増殖を促すことが示された。この患者が持つHLAクラスII遺伝子のうち、どの分子が抗原提示に関わっているかを決定するため、ZN1にX線照射した培養自己骨髄単核細胞を … 加える際に、抗HLA-DR抗体、抗HLA-DQ抗体、または抗HLA-DR2抗体を加えたところ、抗DR抗体または抗DR2抗体を加えた時にのみNT1の増殖反応が抑制された。そこで、CLIP置換型Ii鎖遺伝子発現ベクターに由来するペプチドをHLA-DR2に提示させるため、COS-7細胞にDR2β鎖プラスミドとDR2α鎖プラスミドをトランスフェクトしたところ、抗DR2抗体で認識されるDR2分子の発現が確認された。現在、ペプチドライブラリーをこのCOS7トランスフェクタントに導入し、NT1によるスクリーニングを行っている。一方,同じ患者の自己抗体によって認識される造血幹細胞上の自己抗原をSEREX法によってスクリーニングしたところ、αグロビンペプチド(αグロビン^<1-101>)が同定された。このペプチドとGSTとのfusion蛋白に対する抗体は再生不良性貧血患者25例中21例に検出された。このペプチドにより刺激された患者末梢血単核細胞中には、αグロビン^<1-11>に特異的なCD8陽性T細胞が0.55%含まれていた。さらに、この培養T細胞は自己の造血前駆細胞由来コロニーを、CFU-GMで対照の43%、BFU-Eコロニーで50%に減少させた。以上の所見から、αグロビンは再生不良性貧血における自己抗原の一つであると考えられた。<br />To determine an epitope of a CD4^+ T-cell clone, ZN1, that appears to have an essential role in the development of aplastic anemia, we attempted to establish a system to screen a peptide capable of stimulating this T-cell clone using CLIP-replacement Ii-chain gene expression vectors. ZN1 was immortalized using infection with Herpesvirus saimiri. Stimulation with cultured bone marrow mononuclear cells (BMMCs) in the presence of IL-3 and GM-CSF induced DNA synthesis by ZN1. When monoclonal antibodies (mAbs) against HLA-DR, HLA-DR2 or HLA-DQ were added to the culture, both anti-DR and anti-DR2 mAbs inhibited DNA synthesis by ZN1 in response to cultured BMMCs, suggesting restriction ** antigen recognition by HLA-DR2. Then, we transfected COS7 cells with a DR2 b gene plasmid and a DR a chain plasmid. Flow cytometry confirmed expression of DR2 by the COS7 transfectant. We are now testing interferon-γ excretion by ZN1 stimulated by the HLA-DR2-COS7 that was transfected with CLIP-replacement Ii chain gene vectors.In relation to this project, we screened cDNA library derived from the patient's bone marrow mononuclear cells using serological identification of antigens by recombinant expression cloning to identify autoantigens in AA. IgG antibodies recognizing α globin (residue 1-101, α globin^<1-101>) was detected in the patient's serum. Immunoblotting using recombinant α globin^<1-101> detected the specific antibodies in 21 of 25 (84.0%) AA patients. When the patient's lymphocytes were stimulated with α globin^<1-11>, a low percentage of CD8* T cells reactive to this peptide were generated. The cultured T cells showed cytotoxicity against HLA-A*0201^+JY cells that were pulsed with this peptide. Addition of T cells stimulated by α globin^<1-11> to autologous CD34^+ cells reduced the number of colonies derived from BFU-E and CFU-GM to nearly a half of the control, α globin may serve as a target of immune system attack in AA patients possessing HLA-A-*0201.<br />研究課題/領域番号:13470202, 研究期間(年度):2001 – 2002<br />出典：「自己免疫性再生不良性貧血における自己抗原の解析-CD4陽性T細胞エピトープの同定-」研究成果報告書　課題番号13470202（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-13470202/134702022002kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/)を加工して作成 続きを見る

URL:

http://hdl.handle.net/2297/00063504