※一部利用できない機能があります
| 1.
論文 |
論文
|
中尾, 眞二 ; Nakao, Shinji
|
||||
| 2.
論文 |
論文
|
中尾, 眞二 ; Nakao, Shinji
概要:
金沢大学医薬保健研究域医学系<br />再生不良性貧血(再不貧)における新たな自己抗原を同定するため、造血幹細胞由来の蛋白を再不貧患者血清と反応させたところ、heterogenous nuclear ribonucleoprotein(hn
…
RNPK)に対する抗体が同定された。この抗hnRNP抗体は自己免疫性再生不良性貧血(再不貧)で高頻度に検出されることが明らかになった。この抗体は再不貧患者の約30%に検出され、陽性患者では免疫抑制療法に対する反応性が、陰性患者に比べて有意に高かった。したがって本抗体は再不貧における免疫病態の良いマーカーと考えられた。<br />研究課題/領域番号:19390260, 研究期間(年度):2007 – 2008<br />出典：「自己抗体とCLIP置換型Ii鎖ライブラリーを利用した再生不良性貧血自己抗原の同定」研究成果報告書 課題番号19390260（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））（https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-19390260/19390260seika/)を加工して作成
続きを見る
|
||||
| 3.
論文 |
論文
|
中尾, 眞二 ; Nakao, Shinji
概要:
金沢大学医薬保健研究域医学系<br />余剰造血幹前駆細胞（HSPC）のマーカーであるCXCR4陽性のHSCPを活性化できれば、再生不良性貧血（再不貧）患者の造血機能を改善させられる可能性がある。免疫不全マウスの骨髄内にヒトCD34(+)細
…
胞を移植したところ、3.3-20.4%のヒトCD45陽性細胞の再生を確認した。６pLOH陽性の再不貧患者単球由来iPS細胞からHSPCを誘導し、同じマウスに移植したところ、患者体内で優勢であった6pLOH(+)HSPCのCXCR4(+)細胞割合(平均10.2%)は野生型（50.7％）に比べて有意に低値であった。野生型CXCR4(+)HSPCをin vivoで活性化させる方法を現在検討中である。<br />A chemokine receptor CXCR4 is preferentially expressed by redundant hematopoietic stem/progenitor cells (HSPCs) that do not contribute to hematopoiesis. Stimulation of residual CXCR4(+) HSPCs may restore hematopoietic function of patients with acquired aplastic anemia (AA). First, we optimized method of engrafting an immune-deficient mouse (BRGS mouse) with cord-blood CD34(+) cells using intra-bone marrow injection, and confirmed the presence of human CD45(+) cells that accounted for 3.3-20.4% of the various tissue-derived cells. Next, we induced HSPCs from iPS cells that were generated from monocytes of AA patients possessing 6pLOH(+) leukocytes, which were predominant in the patients’ blood, as a result of uniparental disomy, and injected the HSPCs to the same mice. Regenerating human 6pLOH(+)CD34(+) cells in the mice expressed CXCR4 to a significantly lesser degree (mean 10.2%) than did 6pLOH(-)CD34(+) cells. We are currently exploring a method to activate CXCR4(+) HSPCs in vivo.<br />研究課題/領域番号:15K15360, 研究期間(年度):2015-04-01 - 2017-03-31
続きを見る
|
||||
| 4.
論文 |
論文
|
中尾, 眞二 ; Nakao, Shinji
概要:
金沢大学医薬保健研究域医学系<br />再生不良性貧血（再不貧）発症の初期段階に関与するサイトカインを同定するため、シクロスポリン療法によって改善した非重症再不貧8例の未輸血・未治療時点での末梢血遺伝子発現プロフィルをマイクロアレイにより解
…
析した。その結果、赤血球外造血に関連するいくつかの遺伝子の高発現に加えて、造血幹細胞を静止期に保つIL10、CXCL12などのシグナルパスウェイが活性化されていることが明らかになった。また、免疫抑制療法によって改善した別の再不貧12症例に対するエクソームシーケンシングでは、骨髄異形成症候群で検出される遺伝子変異の他に、造血幹細胞を負に制御しているPEG3、SMARCA2などの変異が同定された。<br />In an attempt to identify cytokines responsible for the development of immune-mediated bone marrow failure, we determined gene expression profiles of peripheral blood leukocytes from eight untreated patients with non-severe aplastic anemia who had not been transfused. Expressions of several genes associated with erythropoiesis as well as signaling pathways involved in the expression of IL10 and CXCL12 were found to be augmented. Whole exome sequencing of peripheral blood leukocytes from 12 aplastic anemia patients who obtained a complete remission after immunosuppressive therapy revealed somatic mutations of genes related to hematopoietic stem cell quiescence such as PEG3 and SMARCA2.<br />研究課題/領域番号:25670448, 研究期間(年度):2013-04-01 - 2015-03-31
続きを見る
|
||||
| 5.
論文 |
論文
|
中尾, 眞二 ; Nakao, Shinji
概要:
金沢大学医薬保健研究域医学系<br />再生不良性貧血（再不貧）においてクローン性造血の原因遺伝子を同定するため、多数例の末梢血DNAを次世代シーケンサーで解析した。その結果、全体の40%に何らかのゲノム異常が検出された。頻度の高い変異はD
…
NMT3A、ASXL1などのMDSでしばしば検出される遺伝子変異であった。変異遺伝子のうち、PIGAとBCOR/BCOR1の存在は、免疫抑制療法に対する高反応性と相関していた。一方、第6染色体短腕の片親性二倍体（6pUPD）により、HLA-B*40:02を欠失した血球を持つ再不貧患者のTリンパ球から、HLA-B61拘束性に造血前駆細胞を傷害する細胞傷害性T細胞の分離に成功した。<br />To determine genomic abnormalities responsible for clonal hematopoiesis in patients with aplastic anemia (AA), we analyzed peripheral blood DNA from 159 patients with aplastic anemia using a next generation sequencer. At least one gene abnormality was detectable in approximately 40% of the patient. Recurrent abnormalities included those of DNMT3 and ASXL1 that were often detected in patients with myelodysplastic syndrome (MDS). However, the presence of PIGA and BCOR/BCOR1 abnormalities were rather associated with good response to immunosuppressive therapy than the risk of evolving into MDS. In another attempt to clarify the immune mechanism of AA, we successfully isolated a cytotoxic T cell clone from an AA patient with uniparental disomy of chromosome 6p, which killed hematopoietic progenitor cells in a resitricted manner by HLA-DRB1*40:02.<br />研究課題/領域番号:24390243, 研究期間(年度):2012-04-01 - 2015-03-31
続きを見る
|
||||
| 6.
論文 |
論文
|
中尾, 眞二 ; Nakao, Shinji
概要:
金沢大学医薬保健研究域医学系<br />再生不良性貧血(AA)症例におけるHLA-Aアレル欠失血球陽性例の頻度を明らかにするため、抗HLA-Aアレル特異的抗体による検出感度を改良し、診断後間もない例を検索したところ、21症例中6例(28.6
…
%)が陽性であり、欠失血球の全顆粒球中の割合は3.9% - 61.1%(中央値8.4%)と、既治療よりも低比率であった。一方、HLA-Aアレル欠失血球陽性AA患者の末梢血CD8陽性細胞を、HLA-B*40:02遺伝子導入K562 陽性細胞で刺激することにより、HLA-B*40:02導入K562のみを特異的に傷害する細胞傷害性T細胞(CTL)クローン(A6)を樹立した。<br />To determine the exact prevalence of HLA-A allele-lacking leukocytes (HLA-LLs) in patients with acquired aplastic anemia (AA), we improved the sensitivity of flow cytometry and examined peripheral blood leukocytes of patients with newly-diagnosed AA patients. HLA-LLs were detectable in 6 (28.6%) of 21 patients who were heterozygous with the HLA-A allele. The percentage of HLA-A allele-lacking granulocytes in the total granulocytes ranged from 3.9% to 61.1% (median 8.4%), which was lower than that in patients in remission after immunosuppressive therapy. Cytotoxic T cell (CTL) clones (A6) were successfully established from one of the patients possessing HLA-LLs by stimulating patient’s CD8+T cells with K562 cells transfected with HLA-B*40:02 gene. A6 CTL killed K562 in B*40:02 restricted manner but did not kill other cells including EB virus-transformed lymphoblastoid cell line and Jurkat T cell line transduced with B*40:02.<br />研究課題/領域番号:23659486, 研究期間(年度):2011-2012
続きを見る
|
||||
| 7.
論文 |
論文
|
中尾, 眞二 ; Nakao, Shinji
概要:
再生不良性貧血(再不貧)患者のゲノム解析により、HLA遺伝子領域を含む第6染色体短腕のuniparental disomy(6pUPD)のため片側のHLA発現を欠失した白血球が、再不貧全体の13%に検出されることを見出した。この6pUPDに
…
よって失われるHLAハプロタイプにはHLA-A^* 02 : 01, A^* 02 : 06, A^* 31 : 01, and B^* 40 : 02の4種類のクラスIアレルが高頻度に含まれており、これらは再不貧の疾患感受性にも関与していた。再不貧は、これらのHLA分子によって提示される自己抗原に特異的な細胞傷害性T細胞が、造血幹細胞を攻撃することによって発症することが示唆された。<br />Genomic analyses of patients with acquired aplastic anemia(AA) revealed the presence of leukocytes lacking an HLA haplotype as a result of uniparental disomy of chromosome 6p in 13% of patients. The missing HLA haplotypes were strongly biased to HLA-A^* 02 : 01, A^* 02 : 06, A^* 31 : 01, and B^* 40 : 02, which were over-represented in Japanese AA cases. Cytotoxic T lymphocytes specific to hematopoietic stem cell-derived auto-antigens presented by the particular HLAs was thought to trigger the development of AA.<br />研究課題/領域番号:21390291, 研究期間(年度):2009-2011
続きを見る
|
||||
| 8.
論文 |
論文
|
中尾, 眞二 ; Nakao, Shinji
概要:
Diazepam binding inhibitor-related protein-1(DRS-1)に対する特異的なT細胞が、骨髄不全患者における発作性夜間ヘモグロビン尿症(PNH)形質血球の出現に関与しているか否かを明らかにするため、抗
…
DRS-1抗体を持つPNH型血球陽性の再生不良性貧血(再不貧)患者から、PIG-A遺伝子に異常を持つPNH型lymphoblastoid cell line(LCL)を樹立した。このPNH型LCLにレトロウイルスベクターや電気穿孔法を用いてDRS-1 cDNAの導入を試みたが、インヒビターが存在しているためか、恒常的にDRS-1を発現させることはできなかった。一方、組換えモエシンを用いたELISAを作製し67人の再不貧患者血清を調べたところ、25人(37%)において高力価の抗モエシン抗体が検出された。PNH型血球陽性再不貧患者43人とPNH型血球陰性再不貧患者24人のそれぞれの抗体保有率は47%、21%であり、PNH型血球陽性患者で有意に高頻度に抗モエシン抗体が検出された。モエシンはUT-7、K562などの骨髄系白血病細胞株と健常者由来CD34+細胞からエクソゾームとして細胞外に分泌されていた。これまでに我々が同定した抗DRS-1抗体、PNH型血球と、今回同定したが抗モエシン抗体の少なくとも一つを認めた再不貧患者では26例中22例(85%)が免疫抑制療法に反応して改善したのに対し、いずれも認めない再不貧患者2例では免疫抑制療法が無効であった。これらの所見から、再不貧患者では造血細胞由来のモエシンに対するB細胞の反応が高頻度に起こっており、抗モエシン抗体、抗DRS-1抗体、PNH型血球の検出を組み合わせることによって、免疫病態が関与する再不貧を診断できる可能性が示唆された。抗モエシン抗体を検出するための酵素免疫抗体法を開発し、特許(再生不良性貧血患者血清に存在する自己抗体の検出方法、特願2004-333725)を取得した。<br />In an attempt to determine whether CD4^+ T cells specific to diazepam-binding inhibitor protein-1 (DRS-1) contribute to the survival advantage of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH)-type stem cells, we established a lymphobastoid cell line with PIG-A mutation from an aplastic anemia (AA) patients showing a high titer antibodies speicific to DRS-1. We tried to transfect the PNH-type LCL cells with DRS-1 cDNA using various methods such as retroviral vectors and electroporation to use them as a target of DRS-1 specific CD4^+ T cells. However, all the methods failed to induce expression of DRS-1 gene in LCL cells, probably due to inhibitory mechanisms for the DRS-1 expression inherent to B lymphocytes. Thus, we suspended this experiments and focused on another candidate autoantigen, moesin.We screened the sera of AA patients possessing small populations of PNH-type cells for the presence of antibodies (Abs) which recognize proteins derived from a leukemia cell line, UT-7. Immunoblott ing using proteins derived from lysates or culture supernatants of UT-7 cells revealed the presence of IgG Abs specific to an 80 kD protein. Peptide mass fingerprinting identified this 80 kD protein as moesin. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using recombinant moesin showed high titers of anti-moesin Abs in 25 (37%) of 67 AA patients. Moesin was secreted from several myeloid leukemia cell lines other than UT-7, such as OUN-1 and K562, as an exosomal protein. The presence of anti-moesin Abs was significantly correlated with the presence of PNH-type cells and anti-diazepam-binding inhibitor-related protein-1 (DRS-1) Abs. AA patients that did not show any of these three markers tended to respond poorly to immunosuppressive therapy. These findings suggest that a B-cell response to moesin, possibly derived from hematopoietic cells, frequently occurs in patients with AA and that detection of anti-moesin Abs in combination with other markers may be useful in diagnosing immune pathophysiology in AA patients.<br />研究課題/領域番号:17390275, 研究期間(年度):2005-2006<br />出典：「骨髄不全における自己抗原特異的T細胞を介したPNHクローン増幅メカニズムの解明」研究成果報告書 課題番号17390275 (KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）) 本文データは著者版報告書より作成
続きを見る
|
||||
| 9.
論文 |
論文
|
中尾, 眞二 ; Nakao, Shinji
概要:
一部の再生不良性貧血(再不貧)患者血清抗体によって認識される白血病細胞株UT-7由来の80kD蛋白を同定するため、免疫沈降により精製したこの蛋白のアミノ酸配列を質量分析を用いて同定した。その結果、この蛋白は細胞膜関連蛋白のモエシンであること
…
が判明した。患者血清中の抗モエシン抗体価をELISA法により測定したところ、再不貧患者43例中20例(46.5%)が陽性であった。抗体の陽性率は、自己免疫性再不貧のマーカーであるPNH型血球陽性の再不貧患者では22例中14例(64%)であったのに対し、PNH型血球陰性の再不貧患者では18例3例(17%)のみであった。一方、UT-7由来のcDNAライブラリーのスクリーニングにより同定した蛋白diazepam-binding inhibitor-related sequence-1 (DRS-1)に対する抗体はPNH型血球陽性再不貧例84例中の32例(38.1%)に検出された。DRS-1のcDNA断片に由来するGST融合蛋白を作成し、各々に対する抗体の有無を決定したところ、抗体陽性者の約半数において、173-198位のペプチドに対する抗体が検出された。HLA-DR15蛋白と結合するT細胞エピトープのペプチドを合成し、DRS-1ペプチド特異的T細胞の前駆細胞頻度をELISPOTアッセイで調べたところ、抗DRS-1抗体陽性でDR15を持つ患者では、検討した2例の両例においてDRS-1特異的T細胞の前駆細胞が高頻度に存在することが示された。このDRS-1ペプチドによって患者末梢血単核細胞から誘導したDRS-1特異的CD4陽性T細胞は、DR15陽性白血病細胞株KH88を用量依存性に傷害した。したがって、抗DRS-1抗体を持つHLA-DR15陽性再不貧患者においては、DRS-1特異的CD4陽性が骨髄不全の発症に関わっている可能性が示唆された。<br />To identify an 80-kD protein derived from a leukemia cell line, UT-7, that was recognized by scrum IgG of a plastic anemia (AA) patients, we purified this protein using immunoprecipitation and determined amino acid sequence with mass fingerprinting. The protein proved to be moesin. When patients' sera were screened using ELISA and recombinant moesin, 20 of 43 (46.5%) AA patients were positive for anti-moesin antibodies. The antibody was detected in 14 of 22 (64%) patients possessing increased paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH)-type cells which are known to be a marker for lmmunopathophysiology of AA while it was detected in only 3 of 18 (17%) patients without increased PNH-type cells.We also identified diazepam-binding inhibitor-related sequence-1 (DRS-1), as a candidate autoantigen of AA using immunoscreening of cDNA library derived from UT-7. Antibodies to this protein were detectable in 32 of 84 (38.1%) of AA patients possessing increased PNH-type cells. Epitope mapping using GST-fusion protein fragments derived from DRS-1 cDNA showed that a 26 mer peptide (amino acid 173-198) contained a hot spot of antibody epitopes which was recognized by nearly half of AA patients showing anti-DRS-1 antibodies. When peripheral blood lymphocytes were examined using ELISPOT assay for the presence of T-cell precursors specific to a DRS-1 peptide which has high affinity to HLA-DR15, two AA patients carrying HLA-DR15 and anti-DRS-1 antibodies showed high frequency of DRS-1-specific CD4^+ T cells. DRS-1-specific T cells generated from one of the two AA patients by stimulating T cells with the DRS-1 peptide showed cytotoxicity against an HLA-DR15^+ and DRS-1-expressing leukemia cell line KH88 in a dose-dependent manner. These findings indicate that in AA patients possessing HLA-DR15 and anti-DRS-1 antibodies, DRS-1-specific T cells may contribute to development of bone marrow failure.<br />研究課題/領域番号:15390298, 研究期間(年度):2003-2004<br />出典：「再生不良性貧血における自己抗原の解析: 自己抗体によって同定された造血幹細胞抗原におけるCD4陽性T細胞エピトープの同定」研究成果報告書 課題番号1539029 (KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）) 本文データは著者版報告書より作成
続きを見る
|
||||
| 10.
論文 |
論文
|
山崎, 宏人 ; Yamazaki, Hiroto
概要:
金沢大学附属病院輸血部<br />TGF-β副受容体であるGPIアンカー膜蛋白CD109が、PIGA遺伝子変異造血幹前駆細胞（HSPC）の優先的活性化に関与しているか否かを明らかにするため、白血病細胞株TF-1のCD109をノックアウト（K
…
O）し、野生型との間で、TGF-βに対する感受性を比較した。その結果、CD109KO TF-1細胞では野生型TF-1細胞に比べてTGF-βによるリン酸化SMAD2の誘導が低下し、TGF-βによる細胞増殖の抑制が起こりにくいことが明らかになった。PIGA遺伝子変異HSPCは、TGF-βの作用増強を担うCD109の欠失によりTGF-βによる抑制を免れて造血に寄与しやすくなることが示唆された。<br />To determine whether a TGF-beta (b) co-receptor CD109 on hematopoietic stem progenitor cells (HSPCs) play a role in the preferential commitment of PIGA mutant HSPCs in patients with immune-mediated bone marrow failure (BMF), we established CD109-knock out (KO) TF-1, a GM-CSF-dependent myeloid leukemia cell line, using the CRIPR/Cas9 system, and compared the sensitivity of CD109KO TF-1 cells to TGF-b to that of wild-type (WT) TF-1 cells. The TGF-b treatment induced pSMAD2 in CD109KO TF-1 cells to a significantly lesser degree than in WT TF-1 cells. The proliferation of CD109KO TF-1 was inhibited by TGF-b also to a lesser degree than WT TF-1 cells. The results suggest that CD109, a glycosylphosphatidylinositol anchor protein, plays an enhancing role in the TGF-b signaling in HSPCs, and the lack of CD109 may make the HSPCs less sensitive to TGF-b, leading to the preferential commitment of the PIGA mutant HSPCs in immune-mediated BMF, in which TGF-b suppresses activation of WT HSPCs.<br />研究課題/領域番号:15K09496, 研究期間(年度):2015-04-01 - 2018-03-31
続きを見る
|
