1.

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中沼, 安二
出版情報: 平成21(2009)年度 科学研究費補助金 基盤研究(B) 研究成果報告書 = 2009 Fiscal Year Final Research Report.  2007-2009  pp.5p.-,  2011-06-06.  金沢大学医学系
URL: http://hdl.handle.net/2297/48279
概要: 今同の研究により、以下の研究成果を上げることが出来た。(1)IPNBの画像、形態、組織像を検討し、IPNBは膵のIPMNの主膵管型に相当することを明らかにした。(2)IPNBの表現型として、膵胆管型、好酸型、腸型、胃型があり、各々で特徴的な 分子の発現パターンおよび臨床病理画像を明らかにした。(3)IPNB発生・進展に関する分子、遺伝子異常を解析し、P53やp16(INK4a)がその発生に、MMP7の発現がその進展、予後に関連することを明らかにした。これらの研究成果を米国肝臓学会誌Hepatologyなどの欧米の一流紙に掲載した。(4)IPNBに関する主題は胆道学会、消化器病学会などの学会で複数同取り上げられ、さらに"肝胆膵"や"胆道"などの専門誌でも特集あるいは特別企画として取り上げられ、IPNBは胆道学では1つのトピックスとなり、大きく研究が展開した。(5)現在、WHOのblue book series(界で最も権威のある腫瘍病理の単行本)の改訂が行われており、胆管系腫瘍(研究代表者中沼が責任編集者)でも、我々が提唱したIPNBと肝胆の粘液産生嚢胞性腫瘍の概念が認められつつある。(6)IPNBに関する研究は国内外で大きな展開を見せており、この基盤研究Bの本来の目的は達成された。<br />The followings are the main results and contributions. Intraductal papillary neoplasm of bile duct (IPNB) shares many features of intraductal papillary mucinous neoplasm of pancreas, particularly main duct type, such as gross and imaging features and histologies. IPNB are classified into the pancreatobiliary type, intestinal type, gastric type and oncocytic type, and these four types show characteric features. During the development and progression of IPNB, p53 and p16 are significantly involved, and MMP7 plays an important role in the progression of IPNB. These issues on IPNB have been discussed in several meetings in Japan and also USA, and IPNB has been accepted as a disease entity in biliary tract tumors. Furthermore, IPNB has just introduced as a disease entity and preneoplastic lesion of cholangiocarcinoma in WHO blue book on Gastrointestinal tract tumor, 2010, and this topic is now discussed and studies worldwide. 続きを見る
2.

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中沼, 安二
出版情報: 平成18(2006)年度 科学研究費補助金 基盤研究(B) 研究成果報告書 = 2006 Fiscal Year Final Research Report Summary.  2003-2006  pp.8p.-,  2007-05-01. 
URL: http://hdl.handle.net/2297/48280
概要: 胆管系疾患の病態形成における自然免疫の関与を、人体材料およびヒト培養胆管細胞を用い、以下の結果を得た。 (1)胆管系自然免疫トレランスの解析:胆管細胞はTLRを発現し、細菌菌体成分などのPAMPs刺激に対して自然免疫応答を示すが、生理的状態 では常在菌体成分に対するトレランスが胆道系ホメオスターシスの維持に重要である。培養胆管細胞を用いた検討にて、TLR4リガンドであるLPSの2段階刺激でエンドトキシントレランスが誘導されることを明らかにし、更にTLR細胞内シグナルの負の制御因子であるIRAK-Mがトレランス誘導に関与していることも明らかにした。 (2)胆道閉鎖症におけるレオウイルス科ウイルスの関与:胆道閉鎖症の原因として二本鎖RNAウイルスであるレオウイルス科ウイルスの感染が推測されている。胆管細胞は二本鎖RNAの認識受容体であるTLR3を発現し、リガンド刺激にてNF-κB活性化およびIFN-β1産生の誘導とアポトーシス誘導分子であるTRAILの発現亢進がみられた。また胆道閉鎖症の肝外胆管ではTLR3とTRAILを発現し、またNF-κBの活性化が証明された。ウイルス感染が胆道閉鎖症の胆管消失に直接関与していることが示唆された。 (3)胆道系自然免疫と胆管細胞アポトーシスの解析:原発性胆汁性肝硬変(PBC)は胆管細胞アポトーシスによる胆管消失を特徴とする自己免疫疾患で、病因として細菌感染症の関与が想定されている。胆管細胞アポトーシスの分子基盤および自然免疫の関与について解析した結果、胆管細胞は蛋白合成抑制状態ではPAMPs刺激にて直接アポトーシスが誘導されることを示し、さらにPAMPsに対する抗アポトーシス効果の一つとしてNF-κB依存性のHIAP-1発現亢進が重要であることを示した。<br />We demonstrated the participation of innate immunity in the pathophysiology of biliary tract by using human materials of hepatobiliary tissues and cultured human biliary epithleial cells. The following three data were obtained. (1) Biliary epithelial cells expressed Toll-like receptor (TLR), and they responded to pathogen associated molecular patterns (PAMPs) as a physiological response of innate immunity. This reaction seemed to be involved physiologically in biliary homeostasis against bacterial components contained in bile. By cultural study, it was found that endotoxin tolerance of TLF4 was induced by two step processes, and that IRAK-M is also involved in this process by a negative regulator. (2) It is reported that biliary atresia could be caused by infection of double strand RNA virus. It was found in this study that biliary epithelial cells express TLR3 reacting with double strand RNA, and NF-B and IFN-β is incuded in these cells by exposing to the ligands of TLR3. In addition, TRAIL, a proapoptotic molecule was also induced in this process. In the affected bile ducts of biliary atresia, TLR3 and TRAIL were expressed in biliary epithelial cells. These findings suggested that virus, particularly double strand RNA virus was likely involved in the pathogenesis of biliary atresia, particularly the apoptotic loss of infected biliary epithelial cells. (3) Primary biliary cirrhosis is an autoimmune liver disease and biliary epithelial cells underwent apoptosis, probably resulting from bacterial infection. By examing the apoptotic mechanisms of biliary epithelial cells and innate immunity, it was found that biliary epithelial cells under protein-recessive state, underwent apoptosis by PAMPs stimulation, and HIAP-1 overexpression was important in antiapoptotic effect of biliary epithelial cells due to PAMPs. These studies showed that innate immunity, especially TLR, is involved in the pathophysiology of the biliary tree.<br />研究課題/領域番号:15390114, 研究期間(年度):2003–2006 続きを見る
3.

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中沼, 安二 ; Nakanuma, Yasuni
出版情報: 平成14(2002)年度科学研究費補助金 基盤研究(B) 研究成果報告書 = 2002 Fiscal Year Final Research Report Summary.  2000-2002  pp.11p.-,  2004-06-01.  金沢大学大学院医学系研究科
URL: http://hdl.handle.net/2297/48281
概要: 肝線維嚢胞症に属する代表的疾患として,カロリ病ならびに先天性肝線維症(congenital hepatic fibrosis, CHF)がある。本研究では,新たに発見された肝線維嚢胞症を発現するラット(polycystic kidney r at ; PCKrat)を実験動物として用い,同ラットの肝線維嚢胞症の特徴や成立機序に関する検討を行い,ヒト・カロリ病ならびにCHFの病因,病態の解明を試みた。得られた成果を以下に要約する。 1.病理組織学的に,PCKラットにおける肝内胆管の拡張は多発性,分節状の嚢状拡張であり,CHFを伴うヒト・カロリ病に極めて類似していることから,PCKラットは同疾患の有用なモデル動物となりうると考えられた。 2.PCKラットでは,拡張した肝内胆管の基底膜において,主要な基底膜構成蛋白であるラミニン,IV型コラーゲンの断裂や消失が認められた。CHF/カロリ病でも同様の変化がみられ,基底膜構成蛋白の異常が胆管拡張の発生・進行に関与している可能性が考えられた。 3.CHF/カロリ病における,肝線維化に関与するCTGFやTGF-βの発現様式・動態は,対照疾患群(慢性肝炎,アルコール性肝疾患等)とは異なっており,CHF/カロリ病にみる肝線維化は,慢性肝炎等とは成立機序が異なることが示唆された。 4.PCKラットや培養肝内胆管上反細胞は,対照ラットと比較して著明な増殖活性亢進を示した。cDNAマイクロアレイ法による検討では,PCKラットの培養胆管細胞で,細胞増殖やアポトーシスに関連する因子(MEK5,TGF-β3,bFGF等)の遺伝子発現の亢進がみられた。また,PCKラットの培養胆管細胞はEGFに対して過剰な増殖反応を示し,EGF受容体阻害剤の投与は過剰な培養胆管細胞の増殖を有意に抑制した。 以上,CHFを伴うヒト・カロリ病のモデル動物とみなしうるPCKラットでは,基底膜構成蛋白の異常,あるいは遺伝子レベルでの細胞増殖制御の不調和があり,それらによる肝内胆管上皮細胞の異常増殖が肝内胆管拡張の発生に関与している可能性が示された。これら一連の成果は,ヒト・カロリ病ならびにCHFの病因,病態の解明に繋がるものであると考える。<br />Carolis disease and congenital hepatic fibrosis(CHF) belong to hepatic fibropolycystic disease. In this study, we used a novel polycystic kidney(PCK) rat, which spontaneously develops hepatic cysts, and characterized the hepatobiliary lesions.1)The cystic changes of the liver of the PCK rats were found to be multiple segmental and saccular dilatations of the intrahepatic biliary tree. These features were very similar to those of Caroli's disease and CHF, demonstrating that the PCK rat could be a promising animal model of Caroli's disease with CHF.2)In the basement membrane of the dilated intrahepatic bile ducts of PCK rats, the expression of extracellular matrix components such as laminin and type IV collangen were reduced or diminished, and the same phenomena were observed In the liver of patients with CHF and Caroli's disease. Abnormal interactions between bile duct epithelia and surrounding basement membrane may play an important role in the hepatobiliary abnormalities of CHF and Caroli's disease as well as the PCK rats.3)The expression pattern of fibrogenic factors such as CTGF and TGF-β in the patient liver of CHF and Caroli's disease was different from those of the chronic hepatitis and alcoholic liver disease, suggesting that different mechanism of hepatic fibrosis exists in these disease.4)The cultured intrahepatic biliary epithelial cells(BECs) of the PCK rats were established. Proliferative activity of the cultured BECs of PCK rats were higher than those of the control rats. cDNA microarray analysis showed overexpression of the genes associated with cell proliferation and apoptosis such as MEK5, TGF-β3 and bFGF. The BECs of PCK rats were shown to be hyperresponsive to EGF, and EGF receptor tyrosine kinase inhibitor significantly inhibited abnormal growth of BECs of the PCK rats.The data obtained here provide insights into the pathogenesis of CHF and Caroli's disease.<br />研究課題/領域番号:12470044, 研究期間(年度):2000–2002 続きを見る
4.

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中沼, 安二 ; Nakanuma, Yasuni
出版情報: 平成9(1997)年度科学研究費補助金 基盤研究(C) 研究成果報告書 = 1997 Fiscal Year Final Research Report Summary.  1996-1997  pp.9p.-,  1998-03-01.  金沢大学医学部
URL: http://hdl.handle.net/2297/48282
概要: 我々はヒト慢性C型肝炎肝組織によてい、小型の門脈域内での小血管内皮にヘモジデリンが沈着する現象を見出した。この現象をの意義を、いくつかの項目別に検討し、以下の結論を得た。 1.この病変が予後予測因子になりうるかどうか:この変化は病期の進展し た慢性C型化肝炎で多くみられ、病期の進展や活動度の正の相関を示した。この病変は自己免疫性肝炎でもしばしばみられ、病期の進展した症例で陽性率が高かった。 2.インターフェロン治療との関連性:慢性C型肝炎でインターフェロン治療後、肝の壊死炎症反応の軽快したやウイルス価の減少、消失した症例では、微小血管に沈着するヘモジデリンは減少する傾向があった。肝細胞の障害に続発して発生した可能性と同時に、肝炎ウイルスの増殖にも関連する可能性が示された。 3.他の慢性肝疾患での出現:低率ではあるが、病期や活動度の進展した原発性胆汁性肝硬変や自己免疫性肝炎でも類似の小血管内皮へのヘモジデリンの沈着がみられ、これらの疾患でも肝細胞の障害に関連してヘモジデリンが逸脱し、内皮に沈着する可能性が示唆された。この現象は慢性C型肝炎に特異的でないことが明らかとなった。 4.ヘモジデリン沈着小血管の肝病態に及ぼす影響:ヘモジデリンの沈着により、内皮細胞本来の機能が障害され、肝内微小循環障害に関連し、慢性C型肝炎の線維化の進展に関与すると考えられた。さらに、内皮細胞が本来持っている免疫学的機能、特に抗原呈示作用にも悪影響を及ぼす可能性が示唆された。<br />We found out a peculiar hemosiderosis involving intrahepatic small vessels in portal tracts in chronic hepatitis C.This lesion is closely related to the advancement (fibrosis) of chronic hepatitis C,but not to hepatitis activity. Infrequently, this lesion was also encountered in other forms of chronic liver diseases with advanced liver diseases such as primary biliary cirrhosis and autoimmune hepatitis. The patients with this lesion have a tendency to resist interferon therapy, suggesting that this lesion is a histologic marker representing poor response to this therapy. Pathogenetically, this lesion might have been caused by leakage of iron-containing substance (s) from the hepatocytolysis of periportal regions during hepatocullelar damages due to hepatitis viral infeciton. This lesion may influence the capacity of antigen presentation and other immunological functions inherent to endothelial cells, because this lesions accompany with expression of HLA-class I and HLA-class II and also other adhesion molecules such as ICAM-1 and VCAM-1. However, this could be beneficial for viral proliferation in chronic hepatitis C,because iron is said to an essential element in proliferation of HCV.The fuction of endothelial cells of small vessels in the liver, particularly their functions in advancedliver diseases, remains unclear. This study will geve a clue to understanding of the pathophysiologic fuction of this endothelial segement.<br />研究課題/領域番号:08670198, 研究期間(年度):1996–1997 続きを見る
5.

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中沼, 安二
出版情報: 平成6(1994)年度 科学研究費補助金 一般研究(B) 研究成果報告書 = 1994 Fiscal Year Final Research Report Summary.  1993-1994  pp.8p.-,  1995-03-01.  金沢大学医学部
URL: http://hdl.handle.net/2297/48283
概要: 胆管系の代表的疾患群である胆管消失症候群の病態と病因を免疫病理学的に検討した。1.わが国での胆管消失症候群として、原発性胆汁性肝硬変が最も多く、次いで原発性硬化性胆管炎で、骨髄移植例に伴う移植片対宿主反応による胆管消失例や薬剤性胆管消失例も みられた。2.原発性胆汁性肝硬変の自己抗原はミトコンドリア内膜上のピルビン酸脱水素酵素のE2成分である。この酵素に対するモノクローナル抗体で原発性胆汁性肝硬変患者の肝臓を免疫染色した結果、障害胆管ではミトコンドリア以外の細胞質が陽性となり、molecular mimicryが病因として示唆された。3.肝内胆管に分布する胆管周囲脈管叢の病理像を検討した。原発性胆汁性肝硬変では、免疫反応に伴った内皮細胞の変化がみられた。原発性硬化性胆管炎では、血管叢に明かな消失があり、循環障害が成因の一部と考えられた。4.原発性胆汁性肝硬変の障害胆管とその周囲の微小環境を検討した結果、ICAM-1やVCAM-1等の細胞接着因子の異常発現が胆管周囲の小血管や胆管上皮にみられ、CD4、CD8陽性のeffector lymphocytesの高度浸潤がみられた。胆管上皮の障害とその微小環境の異常が胆管障害に重要と考えられた。5.マウスの肝内胆管上皮の区分別培養に成功した。胆管樹を作成し、胆管区分を実体顕微鏡下で細切し、コラーゲンゲル内および上で培養し、胆管上皮細胞の純化に成功した。次に、培地中にIFN-γ、TNF-α等のサイトカインを添加し、胆管上皮にHLA-DRやHLA-A,B,C等の抗原が発現されることを示した。6.ANIT等の胆管障害剤と免疫操作の組み合わせで実験的胆管炎を作成し、胆管上皮の壊死とアポトーシスが種々の割合でみられた。ヒトの胆管消失症候群でも壊死+アポトーシスの所見がみられ、この動物のモデルがヒトの胆管消失症候群の病態解明に応用出来ると期待された。<br />Vanishing bile duct syndrome was examined immunopathologically with emphasis on etiology and pathogenesis. 1. Among this syndrome in Japan, primary biliary cirrhosis was most frequent, and the next was primary sclerosing cholangitis. Graft-versus-host disease related to bone marrow transplantation and drug-induced bile duct loss were also occasionally encoutered. 2. In primary biliary cirrhosis, pyruvate dehydrogenase complex E2 on mitochondrial inner membrane was regarded as an autoantigen. Immunohistochemical study using monoclonal antibody disclosed that this complex was aberrantly expressed outside mitochondria, suggesting molecular mimicry pathogenesis of this disease. 3. Peribiliary vascular plexus, a system of blood supply to the bile ducts, was involved immunologically in primary biliary cirrhosis and makedly diminished in primary sclerosing cholangitis. These changes may be related to their pathogenesis. 4. Around the damaged bile ducts of primary biliary cirrhosis, abnormal e xpression of abhesion molecules such as ICAM-1 and VCAM-1 on the endothelial cells and adso bile duct epithelium, were found. Marked infiltration of CD4 and CD8 positive lymphoid cells were also found around these ducts. These abnomal microenviroments may be involved in the pathogenesis of primary biliary cirrhosis. 5. Selective culture of biliary tree was methodologically established, using collagen gel. By this method, it was found that addition of cytokines such as INF-gamma induced abnormal expression of HLA-DR or HLA-A,B,C on cultured bile duct epithelium. Further analysis of biological phenomenon of ductal epitelium of vanishing bile duct syndrome will be expected. 6. Combination of hepatotoxic drugs and immunomodulation created pecular bile duct damages in experimental models, presenting biliary cell necrosis and apoptosis. The latter finding were also found in damaged bile ducts in vanishing bile duct syndrome, suggesting that our animal models could be applied to the evaluation of human vanishing bile duct syndrome.<br />研究課題/領域番号:05454175, 研究期間(年度):1993–1994 続きを見る
6.

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中沼, 安二
出版情報: 平成4(1992)年度科学研究費補助金 一般研究(C) 研究成果報告書 = 1992 Fiscal Year Final Research Report Summary.  1990-1992  pp.5p.-,  1993-03-01.  金沢大学医学部
URL: http://hdl.handle.net/2297/48284
概要: 本研究は、肝内胆管系の各々のレベルでの複合糖質の発現異常の観点から、胆道系疾患の発生、進展を解明することが目的である。用いた方法は免疫組織化学とコラーゲンゲル内培養法である。1.ヒト肝内胆管系での血液型関連糖鎖発現の検討:A,B,H型物質は 、正常の肝内の大型胆管系に分布したが、小型の胆管系での発現はなかった。I型糖鎖のルイスaとbは、正常と病的肝の肝内胆管系に広汎に分布していた。II型糖鎖のルイスXとYの発現は、正常肝では殆どなく、病的肝ではルイスYが高率に胆道系上皮に発現していた。免疫電顕で、これら糖鎖はゴルジ体と管腔面の微絨毛や細胞膜に発現し、これらの部位で糖タンパク質の成分になっていると考えられた。2.肝内胆管系の癌化に伴う複合糖質の変化:肝内結石症合併肝内胆管癌をモデルに検討を試みた。癌関連糖鎖抗原であるCA19-9,DUPAN II,CEAやA,B,H型物質やルイスa,b,X,Yは癌化部では、clonalに発現し、癌そのもののclonalityに対応する変化と考えられた。前癌病変部でも、これらの発現異常が見られたが、clonalityは明かではなかった。3.コラーゲンゲル内で培養した家兎胆道粘膜上皮は、一過性にin vivoでみられた糖鎖の発現や極性が消失した。しかし、培養12時間から上皮細胞内に微絨毛を持つ微小嚢胞が形成され、24時間で多細胞性の嚢胞の形成が見られた。この嚢胞の成熟に比例して、in vivoの家兎胆嚢粘膜にみられる種々の糖鎖が発現し、免疫電顕ではこれらの親和性はゴルジ体や細胞膜、微絨毛にみられ、細胞の極性の形成に糖鎖が重要な役割を演ずることが示唆された。4.今回の研究で、腫瘍性疾患で糖鎖の発現の違いが明かであったが、炎症性疾患に関しては疾患特異的な血液関連糖鎖の発現や増強、消失は軽度であった。今後、病的肝の胆道系上皮を区分別に分け、コラーゲンゲル内で培養し、胆道系の病態と複合糖質発現との関連性を検討する必要があると考えられた。<br />The present project was aimed to correlate the biliary tract diseases and biliary epithelial expression of carbohydrate antigens using immunohistochemstry and collagen gel culture methods. The following results were obtained. 1. A, B and H blood group related carbohydrate antigens were frequently found in the intrahepatic large and septal bile ducts but rare in the small bile ducts of normal livers. However, such expressions were frequent and intense in the diseased intrahepatic small bile ducts irrespective their etiologies. Lewis a and b containing type I chain were expressed diffusely along the normal and abnormal intrahepatic bile ducts. Lewis X and Y containing type II chain were rarely found in the intrahepatic large bile duct in normal livers, though Lewis Y became strongly expressed on the pathologic bile ducts irrespective of their sizes or etiologies. 2. Cancer related carbohydrate residues such as CEA, CA 19-9 and DUPAN II were frequently seen in cholagniocarcinoma associate d with hepatolithiasis, and also their preneoplastic lesions in stone-containing intrahepatic bile ducts. ABH, and Lewis a, b, X, and Y blood group related antigens were lost or strongly expressed clonally in carcinoma tissue, while such clonal expression was not evident in atypical biliary epithelial hyperplasia of the stone-containing bile ducts. 3. Biliary epithelial cells isolated from rabbits and cultured in collagen gel lost transiently their polarity, while they profiliferated and formed unicellular and multicellular cysts, and then they regained their pecular polarities manifested by the expression of carbohydrate residues, microvilli and other markers of cellular polarity. Preliminary study disclosed that carcer cell lines (CCKS 1) from the biliary tract cancer did not show the peculiar carbohydrate distribution and secretion as seen in rabbit biliary epithelial cells after embedding and culture in collagen gel culture. 4. Subculture of individual anatomial elements of biliary epithelial cells from the biliary tract diseases in the colagen gel culture and the altered secretion and production of carbohydrate secretion under various stimuli seems necessary to evaluate the pathophysiology of the intrahepatic biliary tree.<br />研究課題/領域番号:02670135, 研究期間(年度):1990–1992 続きを見る
7.

その他

その他
三輪, 健二 ; 川尻, 剛照 ; 高田, 睦子 ; 藤野, 陽 ; 井野, 秀一 ; 清水, 賢巳 ; 野原, 淳 ; 馬渕, 宏 ; 稲津, 明広 ; 小林, 淳二 ; 北川, 諭 ; 中沼, 安二
出版情報: Circulation journal : official journal of the Japanese Circulation Society.  70  pp.1013-,  2006-04-20.  日本循環器学会
URL: http://hdl.handle.net/2297/14319
概要: 金沢大学大学院医学系研究科
8.

図書

図書
原田, 憲一 ; 中沼, 安二
出版情報: IgG4 関連疾患アトラス.  pp.122-128,  2013-03-03.  IgG4 研究会 / 前田秀典
URL: http://hdl.handle.net/2297/34250
概要: 図書の一部 pp.122-128
9.

論文

論文
尾崎, 聡 ; 北村, 星子 ; 池田, 博子 ; 中沼, 安二 ; 河原, 栄
出版情報: 金沢大学つるま保健学会誌 = Journal of the Tsuruma Health Science Society Kanazawa University.  35  pp.79-82,  2011-12-27.  金沢大学つるま保健学会 = the Tsuruma Health Science Society, Kanazawa University
URL: http://hdl.handle.net/2297/29774
10.

論文

論文
中沼, 安二
出版情報: 金沢大学十全医学会雑誌.  102  pp.697-697,  1993-12-20.  金沢大学十全医学会
URL: http://hdl.handle.net/2297/8477