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論文 |
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中村, 隆弘 ; Nakamura, Takahiro
概要:
金沢大学がん進展制御研究所<br />再生・病態・発癌制御におけるJMドメインを欠失するMet(ΔJM-Met)の役割を明らかにするため、ΔJM-Met安定強制発現MDCK 細胞を用いたin vitroの解析およびΔJM-Metノックインマ
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ウスを用いたin vivoの解析を行った.その結果、ΔJM-MetおよびWTを安定発現するMDCK細胞はともにHGF-Metシグナル特有の生物活性であるスキャッター活性および管腔形成が認められ、またΔJM-Metノックインホモマウスは胎生致死となることが明らかとなった.<br />To address the function of the natural isoform of the Met/HGF receptor during tissue regeneration, disease and oncogenesis, I prepared the MDCK cells that stably express the ΔJM-Met or WT-Met gene and ΔJM-Met knockin mice. As a result, I could not find the any difference between ΔJM-Met and WT-Met expressed MDCK cells in the ability of motility and morphogenesis. Δ JM-Met knockin mice were resulted in embryonic lethal.<br />研究課題/領域番号:21790312, 研究期間(年度):2009-2010
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松本, 邦夫 ; Matsumoto, Kunio
概要:
金沢大学がん進展制御研究所<br />がん細胞の高い浸潤性はがん転移につながる。本研究は、がん細胞における浸潤能獲得機構をエピジェネティック制御異常ならびにHGF-Met系シグナル特性から明らかにするとともに、HGF-Met相互作用を基盤と
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して人工Met制御分子の創製を目的とした。その結果、(1) PRC複合体構成分子のタンパク質分解異常による機能破綻が、MMP-2を含む浸潤関連遺伝子の発現OFF→ONに関与すること、(2) Met-low→Met-highへの階層的発現変化が悪性黒色種の腫瘍成長、浸潤・転移性に関与することを明らかにするとともに、(3) 環状ペプチド性人工Met-アゴニスト/人工HGFの創製に成功した。<br />Tumor invasion, a typical characteristic of malignant tumors, is regulated not only by intrinsic gene expression profile but also extracellular factors. Met activation by HGF participates in tissue regeneration and tumor invasion. We here found that 1) aberrant proteasome-mediated proteolysis in PRC complex participates in activation of genes (e.g., MMP-2) involved in acquisition of 3-D invasiveness in human malignant mesothelioma cells, and 2) Met expression is regulated by hierarchal equilibrium between Met-low and Met-high populations in malignant melanoma cells, by which invasive and metastatic characteristics is conferred. Based on background for HGF-Met protein-protein interactions, Met-binding cyclic peptides were obtained by RaPID system, and the dimerized peptides induced Met activation and Met-mediated biological responses, in indistinguishable ability to HGF. Thus, we succeeded in generation of artificial Met-agonist / artificial HGF composed of macrocyclic peptide.<br />研究課題/領域番号:24300329, 研究期間(年度):2012-04-01 – 2015-03-31
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松本, 邦夫
概要:
HGF-Met受容体系は肝臓を含む組織の再生を支えている。Met受容体-Ser985リン酸化は、Met受容体の細胞表面から細胞内への動態制御を調節することによって、HGF依存的Met活性化をOFFに制御することを明らかにした。組織の傷害・無
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傷性がMet-Ser985をリン酸化・脱リン酸化することによって、Met受容体活性化抑制を介した、過剰な再生の抑制や恒常性維持に関与すると考えられる。<br />HGF-Met pathway participates in tissue regeneration. We found that phosphorylation of Ser985 in the Met receptor regulated dynamics and translocalization of Met, thereby regulating HGF-dependent Met activation. Ser985 phosphorylation was regulated upon liver injury, in a reciprocal manner to Met activation. Phosphorylation and dephosphorylation of Met-Ser985 regulated by tissue injury and intactness may play a role to suppress over-regeneration.<br />研究課題/領域番号:20390077, 研究期間(年度):2008–2010
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松本, 邦夫 ; Matsumoto, Kunio
概要:
Met/HGF受容体のシグナル変換能は傷害・細胞間接着などによって制御され、正常組織においてはたとえHGFが結合しても活性化されない何らかの抑制機構が働いている。本研究では細胞間接着やjuxtamembrane領域(Jxt領域)内のSer9
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85のリン酸化を介したMet受容体抑制機構を解析するとともに、Jxt領域欠損Met(ΔJxt-Met)を発現するノックインマウスの作成を行った。 1.HGFは低細胞密度下の肝細胞の増殖を促す一方、高細胞密度では増殖を促進しない。低細胞密度ではHGFによるMet活性化が持続する一方、高細胞密度ではLARチロシンフォスファターゼがMetを不活化した。Met-LAR複合体形成によるMetの活性化抑制は細胞間接触や組織化を介した再生制御に関与することが示唆された。 2.ΔJxt-Metを発現するノックインマウス作成のため、前年度において選択した相同的組換えを起こしたES細胞からキメラマウスを作成し、キメラマウスの交配によりΔJxt-Met発現マウスを作成するとともに、本マウスでの病理異常を解析した。 3.培養肝細胞系でJxt領域のSer985がリン酸化された状態ではHGFに依存したMet受容体のチロシンリン酸化が抑制された。無傷の肝臓ではSer985がリン酸化されHGFによるMet活性化が抑制されている一方、傷害を引き金にSer985の脱リン酸化が引き起こされ、HGF依存的なMet活性化に一致すること、再生のピークを過ぎると再びSer985はリン酸化され抑制機能が働くことが明らかになった。 Met受容体の抑制機能はHGF-Met系を介した組織再生の制御に関与することが強く示唆された。Met受容体ON〓OFFシグナル変換制御のさらなる解析は形態形成や再生制御の深い理解につながると考えられる。<br />HGF (hepatocyte growth factor) and Met/HGF receptor tyrosine kinase play important roles in tissue regeneration. In non-injured normal tissues, Met activation/tyrosine phosphorylation is suppressed even following binding with HGF. Thus, HGF-dependent Met receptor activation may be regulated by not only HGF-binding but also cellular context such as cell-cell contact and cellular injury. In this research, suppressive mechanisms of Met activation through cell-cell contact and Ser985 phosphorylation in the juxtamembrane domain of the Met were investigated.1. In hepatocytes cultured at a sparse cell density, HGF induced prolonged Met activation and a marked mitogenic response. In contrast, HGF induced transient Met activation but failed to induce mitogenic response in confluent hepatocytes with tight cell-cell contact. Expression of the protein tyrosine phosphatase, LAR increased following HGF-stimulation specifically in confluent hepatocytes. LAR associated with Met and dephosphorylated ty rosine-phosphorylated Met. Thus functional association of LAR and Met underlies the inhibitory mechanism by which HGF-dependent Met activation is suppressed by cell-cell contact.2. In hepatocytes in culture, HGF-dependent Met tyrosine phosphorylation/activation was inhibited when Ser985 was phosphorylated. In the normal liver, Met Ser985 was phosphorylated, however, Ser985 was dephosphorylated after hepatic injury such as partial hepatectomy. In reciprocal manner to Ser985 phosphorylation, Met was activated after hepatic injury. The results suggest that Ser985 in the juxtamembrane domain of Met is regulated by tissue injury and that Ser985 phosphorylation in the juxtamembrane domain of Met may be a mechanism by which HGF-dependent Met activation is suppressed in non-injured organs. Because Met receptor deleted with the juxtamembrane is naturally expressed as a splicing variant, the juxtamembrane of the Met may play an important role in regulation of HGF-dependent Met activation in response to tissue injury.3. Physiological significance of the juxtamembrane domain of Met in the development and tissue regeneration is investigated using the transgenic mice which express only variant Met deleted with the juxtamembrane domain.<br />研究課題/領域番号:18570127, 研究期間(年度):2006–2007<br />出典：「Met/HGF受容体シグナル変換能の制御を介した組織再生・恒常性維持機構の研究」研究成果報告書 課題番号18570127 (KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）) 本文データは著者版報告書より作成
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松本, 邦夫 ; Matsumoto, Kunio
概要:
金沢大学新学術創成研究機構ナノ生命科学研究所<br />細胞増殖因子受容体をダイマー化する人工リガンド技術は再生医療に応用可能であるとともに、従来にない生物活性をもつ人工リガンドを創成できる可能性が考えられる。本研究は、異なる受容体同士を人
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為的にダイマー化することで、ヘテロ受容体のシグナル活性化につながるかを検討した。ダイマー形成の評価系としてsplit luciferase系と原子間力顕微鏡による解析系を確立した。一方、MET受容体、RET受容体、IGF受容体についてヘテロダイマー形成を誘導したが、シグナル活性化は認められなかった。増殖因子受容体の新たな組合せを検討し、ヘテロ受容体活性化人工リガンド創成の可能性を検討することが必要と考えられた。<br />Artificial ligands that induce the dimerization of growth factor receptors may be applicable to regenerative medicine, and generation of artificial ligands that have unique and novel biological activities may be possible. We here investigated signal activation by hetero-dimerization between different growth factor receptors. The split luciferase fusion protein system and observation of receptor molecules by atomic force microscopy were performed and determined to be appropriate for evaluation of growth factor receptor dimerization. Hetero-dimer formation between MET, RET, and IGF receptors was induced in cultured cells using FKBP/FRB fusion receptors, however, activation of these receptor and downstream signaling molecules were not seen. Combination of other growth factor receptors seemed to be required to further clarify possibility for generation of artificial ligands capable of inducing hetero-receptor dimerization and activation.<br />研究課題/領域番号:15K14473, 研究期間(年度):2015-04-01 - 2017-03-31
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井関, 尚一 ; Iseki, Shoichi
概要:
ラット全身における各種の増殖因子の発現・局在部位を形態学的に明らかにするため、増殖因子に対する抗体を用いた光顕および電顕的組織化学、また増殖因子のmRNAに対するDNAプローブを用いた遺伝子組織化学(in situハイブリダイゼーション法)
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を用いて研究を行い、以下の結果を得た。ラット顎下腺において、これまで報告された各種増殖因子以外に新たに肝細胞増殖因子(HGF)が発現していること、その局在部位は顆粒性導管細胞の文筆顆粒であることがわかった(論文1、3)。電子顕微鏡レベルのin situハイブリダイゼーション法の試みとして、ラット顎下腺の顆粒性導管細胞について、35SでラベルしたEGFのプローブと反応後、包埋して超薄切片をつくり、電顕オートラジオグラフィーで検出した。その結果、この方法はmRNAの細胞内局在を検出する目的よりもmRNAを発現する細胞の電顕による同定の目的に有効であることがわかった(論文2、4)。酸性線維芽細胞増殖因子(aFGF)に対する抗体により、ラット膵臓のグルカゴンを産生するA細胞と、腸管粘膜上皮に散在するグルカゴン様ペプチドを産生するL細胞が免疫染色された。この結果は、グルカゴン前駆体を発現する内分泌細胞が特異的にaFGFを産生することを示した(論文5)。血管増生および血管透過性上昇をおこすことで知られる血管内皮増殖因子(VEGF)のラット組織における発現と局在を調べた。ラットの顎下腺は正常ではVEGFをわずかしか発現しないが、動物にイソプロテレノールを投与して顎下腺の増殖刺激を行うと、腺房細胞での一過性の著しいVEGF発現の増加がおこった。この結果は、顎下腺腺房細胞の増殖機構とVEGF産生との間に何らかの関係があることを示した(論文作成中)。<br />We have used both immunohistochemistry and in situ hybridization techniques to determine the sites of localization of immunoreactivity and mRNA signal of various growth factors in the entire rat body, and have obtained the following results :The expression of hepatocyte growth factor (HGF) was demonstrated in the submandibular gland of rats. Both the mRNA signal and immunoreactivity for HGF were localized to the epithelial cells of granular convoluted tubules. This finding added HGF to the list of many growth factors produced in the rodent submandibular gland.As an attempt for the electron microscopic in situ hybridization, the cryostat sections of rat submandibular gland were first treated for in situ hybridization with ^<35>S-labelled EGF probe and then embedded in epoxy resin for electron microscopic radioautography. The result suggested that this method is more useful for identifying morphologically the type of mRNA-positive cells than determining the subcellular localization of mRNA.An immunohistochemical study using an antibody against acidic fibroblast growth factor (aFGF) revealed that subpopulations of endocrine cells in the pancreas and small intestinal mucosa are positively immunostained in their secretory granules. This result suggested that an aFGF-like substance is produced by the cell populations that express glucagon-precursor.The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) is very low in the normal rat submandibular gland. However, a stimulation of submandibular gland to grow by isoproterenol caused a transient rise in the rate of expression of VEGF in this organ that peaked at 1 h after the stimulation. The mRNA was localized to the acinar cells. This result suggested a certain relation between isoproterenol-induced growth of submandibular gland and VEGF effects on the blood vessels.<br />研究課題/領域番号:06670014, 研究期間(年度):1994-1995<br />研究機関: 金沢大学医学部<br />出典：「細胞増殖因子の発現と局在に関する組織化学的研究」研究成果報告書 課題番号06670014(KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）) 本文データは著者版報告書より作成
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