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三平, 伸一
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紺谷, 悌二
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平井, 純
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横川, 明男
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土屋, 弘行 ; Tsuchiya, Hiroyuki
概要:
癌抑制遺伝子p53の状態が異なる3種類のヒト骨肉腫細胞株に野生型p53遺伝子をリポフェクション法で導入し、p53蛋白の発現量、細胞増殖能、およびシスプラチンによる殺細胞効果の変化を検討し、さらにDNA修復阻害作用を持つカフェインを併用した時
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のp53蛋白の発現と殺細胞効果に与える影響についても検討した。正常p53蛋白を発現するOST株では、野生型p53遺伝子の導入前後でp53蛋白の発現量、細胞増殖能、シスプラチンの殺細胞効果、カフェイン併用時のp53蛋白の発現抑制効果ならびに殺細胞効果増強の変化は認められなかった。変異型p53蛋白を発現するHOS株では、遺伝子導入後に細胞増殖速度の低下が認められたが、細胞増殖能、およびシスプラチン単独ならびにカフェイン併用時の殺細胞効果増強に変化は認められなかった。p53遺伝子が欠失し、p53蛋白の発現を全く認めないSaos2株では、遺伝子導入後のSaos2/p53株において、p53蛋白の発現が認められるようになり、細胞増殖速度の低下、およびシスプラチン単独ならびにカフェイン併用時のp53蛋白の発現抑制効果と殺細胞効果増強が認められた。さらにSaos2/p53株ではSaos2株に比べ、シスプラチンのみ、およびカフェイン併用時のいずれもTUNEL法とDNAラダーの観察によりアポトーシス誘導の増強が認められた。以上より正常型p53蛋白は細胞周期の調節およびシスプラチン処理時のアポトーシス誘導を含む多機能な作用を有することと、カフェイン併用時のシスブラチンに対する殺細胞効果増強には、正常p53蛋白の発現が必要であることが明らかとなった。このことから、p53遺伝子の異常のため化学療法に抵抗性を示す骨肉腫症例に対して、野生型p53遺伝子を用いた遺伝子治療とカフェイン併用化学療法により、抗癌剤に対する感受性の増強が期待できると考えられた。<br />The p53 tumor suppressor gene product is an important participant in the cellular response to DNA damage. This response results in either Gl cell cycle arrest or cell death by apoptosis. Therefore, the status of p53 can be expected. to affect the cellular response to DNA-damaging cytotoxic agents. The present study was performed to investigate whether introduction of the wild-type p53 gene into human osteosarcoma cells could change growth rates and enhance the cytocidal effect of cisplatin and the synergistic antitumor effect of caffeine. Three human osteosarcoma cell lines, OST (wild p53 alleles) , Saos2 (both p53 alleles deleted) , and HOS, (both mutant p53 alleles) were used. Wild-type p53 expression plasmid was transfected into each of the osteosarcoma cell lines by using the lipofection method. The transfected cells, Saos2/p53 and HOS/p53, showed a reduction in growth rate compared with the parent cells. WST-1 assay, performed to assess the cytocidal effect of cisplatin and the sy nergistic antitumor effect of caffeine, showed that Saos2/p53 cells were twice as sensitive to cisplatin alone in 1C50 than were Saos2 cells. The synergistic antitumor effect of caffeine also enhanced in the Saos2/p53 cell line. The other two transfected cells revealed no significant differences from their respective parent cells. Furthermore, TUNEL assay used to analyze apoptotic events in Saos2 cells and Saos2/p53 cells that were treated either with cisplatin alone or with cisplatin and caffeine revealed that compared with the parent Saos2 cell line, Saos2/p53 become most sensitive to cisplatin alone and to cisplatin with caffeine. OST/p53 and HOS/p53 cell lines did not show any significant increase in sensitivity to either cisplatin alone or to cisplatin with caffeine. These results demonstrate that the cytocidal effect of cisplatin and the synergistic antitumor effects of caffeine are enhanced by introduction of the wild-type p53 gene in a human osteosarcoma cell line with deleted p53 alleles, indicating the possibility of gene therapy using the p53 gene for human osteosarcomas with abnormal p53 status.<br />研究課題/領域番号:09671479, 研究期間(年度):1997-1998<br />出典：「骨肉腫におけるp53発現制御によるシスプラチン耐性の克服」研究成果報告書 課題番号09671479 (KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）) 本文データは著者版報告書より作成
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